Народилася 29 жовтня 1985 року в Одесі.
У 2008 році закінчила Київський національний університет імені Тараса Шевченка, отримала кваліфікацію юриста-міжнародника, перекладача з англійської мови.
У 2016 році Стефанишина закінчила Одеський національний економічний університет за спеціальністю "Фінанси і кредит".
Дипломатичні академії у Відні (Австрія) і Таллінні (Естонія).
Одружена, має дочку.
З 2006 по 2007 рік займалася приватною юридичною практикою.
2007—2010 працювала в Державному департаменті з питань адаптації законодавства на посаді спеціаліста-керівника відділу з питань правового забезпечення європейської інтеграції.
2010—2015 — Департамент міжнародного права/Департамент європейської інтеграції у Міністерстві юстиції України, заступник директора/директор.
З березня по грудень 2017 року працювала директором Урядового офісу з питань європейської та євроатлантичної інтеграції Секретаріату Кабінету міністрів.
В грудні 2017 року була призначена на посаду генерального директора Урядового офісу координації європейської та євроатлантичної інтеграції Секретаріату Кабінету міністрів.
З січня по червень 2020 році працювала радником у юридичній фірмі «Ілляшев та Партнери».
На позачергових парламентських виборах 2019 року Ольга Стефанішина балотувалася до Верховної Ради за списками партії «Українська Стратегія Гройсмана» під № 25, але в парламент не пройшла.
4 червня 2020 року Верховна Рада проголосувала за призначення Ольги Стефанішиної Віце-прем'єр-міністром з питань європейської та євроатлантичної інтеграції України. Член РНБО з 17 серпня 2020 року.
3 вересня 2024 року Віце-премʼєр міністерка по питанням євроінтеграції Ольга Стефанішина подала до Ради заяву про відставку. 4 вересня 2024 року Рада підтримала звільнення Стефанішиної з посади віцепрем'єр-міністра.
5 вересня 2024 року Верховна Рада підтримала призначення Ольги Стефанішиної на посаду віце-прем'єр-міністра з питань європейської та євроатлантичної інтеграції України – міністра юстиції України.
Має 5-й ранг державного службовця. Нагороджена Почесною грамотою Кабінету Міністрів України.
05.09.2024