Народився 9 травня 1981, Макіївка, Донецька область, Україна.
У 1998 році закінчив Макіївський міський ліцей.
Був прописаний у м. Макіївка за адресою вул. Руднєва, 3 кв. 68.
У 1999–2000 роках проходив службу в рядах Національної гвардії України.
Навчався у Донбаській національній академії будівництва і архітектури на факультеті економіки, маркетингу і менеджменту, однак навчання не закінчив.
З 2002 року працював у торговельній компанії «Солодке життя».
Після появи фінансової піраміди «МММ-2011» став активним її учасником, розпочавши кар'єру в піраміді з посади десятника.
У 2013 році балотувався по округу № 94 (Київська область) на повторних виборах народних депутатів України від політичної партії «Ми Маємо Мету», що виникла на основі піраміди. Набрав всього 77 голосів, що склали близько 0,08 % від загальної кількості.
Під час подій Революції Гідності знаходився у Києві.
Вперше виступив на проросійському мітингу на центральній площі Донецька 8 березня 2014 року, де ще й пригощав своїх знайомих чаєм та їжею.
5 квітня 2014 року назвався заступником самопроголошеного губернатора Донеччини Павла Губарєва, що був раніше заарештований співробітниками СБУ, та очолив донецький мітинг, на якому було висунуто вимоги про проведення референдуму на зразок кримського. 6 квітня мітингувальники під тими ж гаслами захопили будівлю Донецької ОДА.
7 червня 2014 року поблизу ресторану «Міленіум» у Донецьку на нього був скоєний замах: з автомобіля, що проїздив повз його машину, стріляли, за інформацією видання «Новости Донбасса», перед замахом відбулась сварка між групами терористів. Від куль помер помічник голови «Верховної Ради» Донецької народної республіки з гуманітарних питань Максим Петрухін, а сам Пушилін не постраждав.
31 січня 2015 під час зустрічі у Мінську як представник ДНР та ЛНР погрожував українській стороні «відновленням повномасштабних бойових дій по всій лінії зіткнення».
За заявами голови СБУ Валентина Наливайченка, МММ має відношення до фінансування пунктів вербування добровольців-терористів для ведення бойових дій на території Донецької та Луганської областей. З його слів, два представники ДНР на території РФ є активістами МММ. Є одним із керівників українського відділення МММ.
14 січня 2021 року з'явилася інформація про те, що Пушилін закликав підтримати протестні акції в Україні для організації «всеукраїнської народної революції».
10 червня 2022 року в Донецьку біля офісу Пушиліна прогримів вибух.
27 грудня 2023 року Пушиліна заочно засуджено до 15 років ув’язнення з позбавленням права обіймати посади в органах державної влади, державного управління, місцевого самоврядування, пов’язаних з наданням публічних послуг. Йому інкриміновано посягання на територіальну цілісність і недоторканність України, а також колабораційну діяльність.
За дії і політику, які підривають територіальну цілісність, суверенітет і незалежність України Пушилін Денис Володимирович, доданий до списків підсанкційних осіб.
05.05.2024